protocolo de citometria

Protocolo de coloração de citometria de fluxo (FACS) (coloração da superfície celular)

• Colher, lavar as células (suspensão de célula única) e ajustar o número de células a uma concentração de 1-5x106 células / ml em tampão FACS gelado (PBS, 0,5-1% BSA ou 5-10% FBS, 0,1% NaN3 azida sódica * ). ...
• Adicione 100 μl de suspensão de células a cada tubo.

1. Para que serve a citometria de fluxo?
2. Qual é o princípio da citometria de fluxo?
3. O que pode medir a citometria de fluxo?
4. Como você cora células para citometria de fluxo?
5. A citometria de fluxo pode detectar células mortas?
6. Pode a citometria de fluxo detectar leucemia?
7. Por que a luz laser é usada na citometria de fluxo?
8. Como a citometria de fluxo é usada em hematologia?
9. Como você representa os dados de citometria de fluxo?
10. Pode a citometria de fluxo detectar linfoma?
11. Quanto tempo levam os resultados da citometria de fluxo?
12. Como você compensa a citometria de fluxo?

Para que serve a citometria de fluxo?

A citometria de fluxo é um método laboratorial usado para detectar, identificar e contar células específicas. Este método também pode identificar componentes específicos dentro das células. Esta informação é baseada em características físicas e / ou marcadores chamados antígenos na superfície da célula ou dentro das células que são únicas para aquele tipo de célula.

Qual é o princípio da citometria de fluxo?

O princípio básico da citometria de fluxo é a passagem das células em arquivo único na frente de um laser para que possam ser detectadas, contadas e classificadas. Os componentes da célula são marcados com fluorescência e, em seguida, excitados pelo laser para emitir luz em comprimentos de onda variados.

O que pode medir a citometria de fluxo?

A citometria, em sua forma mais pura, é a medição das características das células, que podem incluir tamanho da célula, contagem de células, ciclo celular e muito mais. Esta técnica permite que os pesquisadores obtenham informações altamente específicas sobre células individuais.

Como você cora células para citometria de fluxo?

Diluir o reagente secundário apropriado marcado com fluorocromo em 100 µL de tampão de coloração para citometria de fluxo e adicionar às células. Incubar por pelo menos 30 minutos a 2-8 ° C ou no gelo. Proteja da luz. Lave as células adicionando tampão de coloração de citometria de fluxo.

A citometria de fluxo pode detectar células mortas?

A perda da integridade da membrana é um indicador definitivo de morte celular em ensaios de citometria de fluxo. As células que excluem um corante de célula morta são consideradas viáveis, enquanto as células com uma membrana comprometida permitem que o corante dentro da célula corante um componente interno, identificando assim a célula como morta.

Pode a citometria de fluxo detectar leucemia?

A imunofenotipagem por citometria de fluxo pode ser realizada em sangue, medula óssea ou outras amostras para fornecer essas informações adicionais. Ele pode detectar células normais, bem como células anormais, cujo padrão de marcadores são normalmente vistos com tipos específicos de leucemia e linfoma.

Por que a luz laser é usada na citometria de fluxo?

Lasers são usados ​​em citometria de fluxo como fonte de excitação de amostras de células marcadas com fluoróforo. Freqüentemente, várias cores de laser são necessárias para caracterizar várias propriedades celulares.

Como a citometria de fluxo é usada em hematologia?

A citometria de fluxo tem sido usada para identificar com precisão e fenotipar as hemácias do receptor (44). A citometria de fluxo está sendo usada cada vez mais no banco de sangue para avaliar a contaminação de leucócitos em produtos sanguíneos com redução de leucócitos (45) (46)..

Como você representa os dados de citometria de fluxo?

Os dados de citometria de fluxo são normalmente representados em uma de duas maneiras: histogramas, que medem ou comparam apenas um único parâmetro, e gráficos de pontos que comparam 2 ou 3 parâmetros simultaneamente em um gráfico de dispersão bidimensional ou tridimensional.

Pode a citometria de fluxo detectar linfoma?

A citometria de fluxo pode diagnosticar o linfoma de Hodgkin clássico em linfonodos com alta sensibilidade e especificidade.

Quanto tempo levam os resultados da citometria de fluxo?

Esses padrões são comparados aos padrões normais para determinar a significância dos resultados. O teste leva aproximadamente três horas e consiste em tingir as células, adquiri-las em um citômetro de fluxo e, em seguida, pedir a um tecnólogo qualificado que analise os resultados que foram salvos em um arquivo de computador.

Como você compensa a citometria de fluxo?

Como compensar um experimento de citometria de fluxo de 4 cores corretamente

1. 4 etapas para compensar um experimento de 4 cores. ...
2. Escolha a transportadora correta para compensação. ...
3. Etapa 2: colete os dados e verifique se há um número suficiente de eventos. ...
4. Calcule a compensação corretamente. ...
5. Aplicar os valores de compensação e inspecionar os resultados.